医学电镜观察问题简析 II——培养细胞TEM观察
李伯勤
辨析：富集-固定？-保存-制备技术？ / 细胞状态 / 微生物污染
接收同一个课题组、同一批培养细胞，实验室由专人同批次做常温TEM制备。观察细胞超薄切片，发现一个不好
解释的问题：部分细胞形态结构正常，部分细胞出现严重的“刀砍像” 。怎么解析？
形成“刀砍像”的原因在于脱水-渗透过程，其中脱水是主要原因。脱水不彻底，组织细胞内滞留了游离水（含丙酮），在用低浓度梯度渗透液进行渗透过程中，虽然部分渗透液可以溶入游离水（=稀释渗透液），但随着渗透液浓度梯度的增加，溶入的越来越少，导致局部区域出现刀砍样低密度区。由于少量渗透液溶入游离水，所以不会形成完全透明的空化区。（下图）
众所周知，对于组织脱水-渗透时间取决于其致密程度。而培养细胞，做TEM需要离心富集使细胞形成团块。对于离心速率高+时间长的，细胞排列紧密，其脱水-渗透必须像对致密组织那样操作，否则容易出现“刀砍像”。
辨析： 由上述可推测，①细胞排列密实，课题组选择了稍高的离心速率 / 较 长的离心时间； ②或者由不同的操作者、或部分细胞组选择了更高的离心 速率和时间，形成更加致密的细胞团块。
实验室不知情，采用培养细胞的常规制备方法，对那些离心富集更致 密的细胞，会造成脱水-渗透问题，部分细胞组出现“刀砍像”是必然的。 随后，与课题组的交流，证明上述辨析是正确的。重新取材。